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小鼠白介素ELISA试剂盒的正确操作步骤介绍

点击次数:67发布时间:2022-05-17
       小鼠白介素ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
  小鼠白介素ELISA试剂盒操作步骤:
  实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37溶解);试剂或样品配制时均需充分混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
  1、加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100,余孔分别加标准品或待测样品100,注意不要有气泡,加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37温育2小时。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
  2、弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100(临用前配制),酶标板加上覆膜,37温育1小时。
  3、弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400/每孔,甩干(也可拍将孔内液体拍干)。
  4、每孔加检测溶液B工作液(临用前配制)100,加上覆膜,37温育1小时。
  5、弃去孔内液体,甩干,洗板5次,方法同步骤3。
  6、每孔加底物溶液90,酶标板加上覆膜37避光显色(反应时间控制在15-30分钟,当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显时,即可终止)。
  7、每孔加终止溶液50,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
  8、立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值)。
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